設(shè)備簡介

細胞能量代謝技術(shù)近年來已發(fā)展成為細胞生物學研究中的重要工具，廣泛應用于生命科學和醫(yī)學前沿領(lǐng)域。本實驗室的Seahorse XFe96 Analyzer (Agilent) 

 

細胞能量代謝儀，采用專利固態(tài)熒光探針通過非電解法實時檢測細胞耗氧率 (oxygen consumption rate, OCR) 和細胞外酸化率 (extracellular acidification rate, ECAR) 

 

96個獨立的光電二極管檢測器同時對96孔細胞進行數(shù)據(jù)采集，并用自動化分析軟件 (Wave) 分析得出細胞的代謝特征；具有細胞使用量小和活細胞實時監(jiān)測等優(yōu)點。

主要功能及檢測流程

1、主要功能

Seahorse XFe96 Analyzer需與Agilent公司的XF細胞培養(yǎng)板、固態(tài)傳感器探針板和各類代謝試劑盒配合使用來分析細胞的相應代謝特征，現(xiàn)有代謝試劑盒為Agilent Seahorse XF Real-Time ATP Rate Assay Kit、Agilent Seahorse XF Cell Energy Phenotype Test Kit、Agilent Seahorse XF Cell Mito Stress Test Kit、Agilent Seahorse XF Glycolysis Stress Test Kit、Agilent Seahorse XF Mito Fuel Flex Test Kit等。

2、以線粒體壓力檢測試劑盒 (Agilent Seahorse XF Cell Mito Stress Test Kit) 為例介紹主要檢測流程

（1） 96孔XF細胞培養(yǎng)板的孔底面積是普通96孔細胞培養(yǎng)板的40%，每孔接種細胞懸液為80 μl；接種合適的細胞量并做好預處理。

（2）把細胞培養(yǎng)板中的原有培養(yǎng)基更換為檢測培養(yǎng)基，在探針板每個孔的加藥室A、B、C中對應加入oligomycin、FCCP和rotenone/antimycin 。

 

培養(yǎng)基和藥物用量按說明書。

（3）把加好藥物的固態(tài)傳感器探針板放入細胞培養(yǎng)板中后，將兩者置入Seahorse XFe96 Analyzer，啟動相應檢測程序。

（4）在檢測基礎(chǔ)OCR和ECAR后，oligomycin、FCCP和rotenone/antimycin將依次被從加藥室中注入檢測培養(yǎng)基。在每種藥物注入后，儀器將按“混勻-檢測”循環(huán)重復測定3次數(shù)據(jù)，形成實時監(jiān)測曲線。

 

（5）結(jié)果分析。oligomycin、FCCP和rotenone/antimycin能夠影響線粒體呼吸鏈活性。

 

而改變細胞的OCR和ECAR，通過軟件分析所測數(shù)據(jù)可反映出細胞線粒體的代謝特征。

 

檢測結(jié)束后，需要通過總蛋白定量或hoechst細胞核染料確定細胞量對原始數(shù)據(jù)進行歸一化，排除細胞數(shù)量對結(jié)果的影響。

實驗實例

1、乳酸對非小細胞肺癌細胞線粒體功能的影響[1]。

 

[1] Lactate modulates cellular metabolism through histone lactylation-mediated gene expression in non-small cell lung cancer. Front Oncol. 2021 Jun 2;11:647559. doi: 10.3389/fonc.2021.647559. eCollection 2021.

2、同型半胱氨酸對大鼠大腦皮層神經(jīng)元細胞系RN-c線粒體功能的影響[2]。

 

[2] High-concentration homocysteine inhibits mitochondrial respiration function and production of reactive oxygen species in neuron cells. J Stroke Cerebrovasc Dis. 2020 Oct;29(10):105109. doi: 10.1016/j.jstrokecerebrovasdis.2020.105109.

詳細情況，歡迎咨詢中心實驗室，聯(lián)系人：黃登亮

電話：0971-5512183/0971-5512751

 

供稿：中心實驗室    黃登亮